نام فارسی محصول : کلاژناز
Product Name : Collagenase from Clostridium histolyticum
Catalog number : C0130
Company : Sigmaaldrich
کلاژناز (Collagenase) یک پروتئاز است که پروتئین سه رشته‌ای به نام کلاژن را می‌شکند. سه نوع کلاژناز بافتی وجود دارد که همگی متعلق به خانواده متالوپروتئینازهای ماتریکس (MMP) هستند. کلاژناز به دست آمده از Clostridium histolyticum فعالیت بسیار قوی دارد، زیرا کلاژن را از هر دو انتها، در دماهای پایین 4 تا 10 درجه سانتی‌گراد، هضم می‌کند. مخلوط‌های کلاژناز خام حاوی دو نوع آنزیم اصلی هستند: کلاژناز و کلستریپین.
کاربرد کلاژناز (Collagenase)
کلاژناز (Collagenase) حاصل از Clostridium histolyticum کاربرد گسترده‌ای در مطالعات بیولوژیکی دارد، جایی که برای تهیه سوسپانسیون‌های سلولی جدا شده استفاده می‌شود. این محصول برای تجزیه تومور انسانی، کلیه موش، مغز بالغ و جنینی انسان، ریه و بسیاری از بافت‌های اپیتلیایی دیگر مناسب است. همچنین نشان داده شده است که در مطالعات پرفیوژن کبد و کلیه، هضم پانکراس، جداسازی سلول‌های کبدی غیر پارانشیمی موش و تهیه هپاتوسیت مؤثر است. کلاژناز همچنین در تهیه بافت شریانی برای مطالعه محصولات نهایی گلیکوزیلاسیون پیشرفته استفاده شده است. این آنزیم برای آزادسازی هپاتوسیت‌ها در غلظت تقریباً 1 میلی‌گرم در میلی‌لیتر آزمایش شده است. غلظت‌ها برای هضم از 0.1 تا 5 میلی‌گرم در میلی‌لیتر متغیر است.
ویژگی‌های عملکردی کلاژناز (Collagenase)
- دارای ویژگی اختصاصی برای شکستن پیوندهای خاص در مولکول کلاژن، که امکان استخراج سلول‌ها از بافت‌های متراکم را فراهم می‌کند.
- در ترکیب با آنزیم‌های دیگر مانند هیالورونیداز، تریپسین و الاستاز، به بهبود عملکرد جداسازی سلولی کمک می‌کند.
- می‌تواند در دماهای فیزیولوژیکی (۳۷ درجه سانتی‌گراد) و در محیط‌های بافر خاص مانند TESCA buffer محلول شود و فعالیت مطلوب خود را حفظ کند.
Synonym(s):Clostridiopeptidase A
شماره CAS: 9001-12-1
شماره EC: 232-582-9
شماره MDL: MFCD00130830
کد UNSPSC: 12352204
NACRES: NA.54
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| حالت | پودر لیوفیلیزه |
| فعالیت ویژه | ≥125 CDU/mg solid |
| وزن مولکولی | 68,000 تا 125,000 |
| pH بهینه | 6.3-8.8 |
| حلالیت | بافر TESCA (50 میلی‌مولار TES، 0.36 میلی‌مولار کلرید کلسیم، pH 7.4)، محلول 1-2 mg/mL در 37 درجه سانتی‌گراد |
| دمای نگهداری | 2-8°C |
- دارای ویژگی اختصاصی برای شکستن پیوندهای خاص در مولکول کلاژناز (Collagenase)، که امکان استخراج سلول‌ها از بافت‌های متراکم را فراهم می‌کند.
- در ترکیب با آنزیم‌های دیگر مانند هیالورونیداز، تریپسین و الاستاز، به بهبود عملکرد جداسازی سلولی کمک می‌کند.
- می‌تواند در دماهای فیزیولوژیکی (۳۷ درجه سانتی‌گراد) و در محیط‌های بافر خاص مانند TESCA buffer محلول شود و فعالیت مطلوب خود را حفظ کند.
کلاژناز (Collagenase) به دلیل نقش کلیدی خود در پردازش و تجزیه بافت‌ها، به عنوان یک ابزار ارزشمند در تحقیقات زیست‌پزشکی، داروسازی و مهندسی بافت شناخته می‌شود. استفاده از این آنزیم در شرایط استاندارد و بهینه‌سازی شده، می‌تواند استخراج سلول‌های زنده و عملکردی را از انواع بافت‌ها تسهیل کند و در پیشبرد مطالعات سلولی و مولکولی نقش مؤثری ایفا نماید.
عملکرد بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی
کلاژناز (Collagenase) توسط چهار اتم گرم کلسیم در هر مولکول آنزیم فعال می‌شود. توسط اتیلن گلیکول-بیس(بتا-آمینو اتیل اتر) – N، N، N’، N’-تترااستیک اسید، بتا-مرکاپتواتانول، گلوتاتیون، اسید تیوگلیکولیک و 8-هیدروکسی کینولین مهار می‌شود.
محصول کلاژناز (Collagenase) مخلوطی از آنزیم‌های ترشح شده توسط C. histolyticum است که محصولات مختلف با نسبت‌های نسبی 10 تا 18 جزء موجود در آنزیم‌های ترشح شده متمایز می‌شوند. اجزای اصلی دو کلاژناز، کلستریپین و یک پروتئاز خنثی هستند. عمل هم افزایی این آنزیم‌ها کلاژن و سایر مواد داخل سلولی را تخریب می‌کند. عمل هر دو آنزیم کلاژناز و پروتئاز خنثی برای آزادسازی مؤثر سلول‌ها از بافت ضروری است. انواع مختلف کلاژن بسترهای طبیعی کلاژناز هستند.
احتیاط
این محصول به صورت عرضه شده، به مدت یک سال در دمای 20- درجه سانتی‌گراد پایدار است. هیچ کاهش در فعالیت FALGPA یا پروتئاز در 30 روز در دمای 37، 50 و 20- درجه سانتی‌گراد وجود ندارد. محلول‌های کلاژناز خام اگر به سرعت در آلیقوت‌ها (در 10 میلی‌گرم در میلی‌لیتر) منجمد شوند و در دمای 20- درجه سانتی‌گراد منجمد نگهداری شوند، پایدار هستند. چرخه‌های انجماد و ذوب بیشتر به محلول آسیب می‌رساند. این محصول هنگام نگهداری روی یخ به مدت 7 ساعت 100% فعالیت خود را حفظ می‌کند.
تعریف واحد
یک واحد هضم کلاژناز (Collagenase) (CDU) پپتیدها را از کلاژن تاندون آشیل گاوی آزاد می‌کند که از نظر رنگ نین هیدرین معادل 1.0 میکرومول لوسین در 5 ساعت در pH 7.4 در دمای 37 درجه سانتی‌گراد در حضور یون‌های کلسیم است. یک واحد هیدرولیز FALGPA 1.0 میکرومول فوریاکریلوئیل-Leu-Gly-Pro-Ala را در دقیقه در دمای 25 درجه سانتی‌گراد هیدرولیز می‌کند. یک واحد پروتئاز خنثی کازئین را هیدرولیز می‌کند تا رنگی معادل 1.0 میکرومول تیروزین در 5 ساعت در pH 7.5 در دمای 37 درجه سانتی‌گراد تولید کند. یک واحد کلستریپین 1.0 میکرومول BAEE را در دقیقه در pH 7.6 در دمای 25 درجه سانتی‌گراد در حضور DTT هیدرولیز می‌کند.
یادداشت آماده‌سازی کلاژناز (Collagenase)
کلاژناز (Collagenase) معادل 40% اول بخش سولفات آمونیوم از Mandl, I. و همکاران، J. Clin. Invest.، 32، 1323 (1953) است. محلول‌ها معمولاً با غلظت 1-2 میلی‌گرم در میلی‌لیتر در بافر TESCA (حاوی 50 میلی‌مولار TES، 0.36 میلی‌مولار کلرید کلسیم، pH 7.4 در دمای 37 درجه سانتی‌گراد) تهیه می‌شوند.
