نام فارسی محصول : کیت سنتز cDNA
Product name : cDNA Synthesis Kit
Cat Num : BR0400401
Size: 10 reactions
Company : biotechrabbit
وضعیت : موجود یا سفارشی
توضیحات: کیت سنتز cDNA biotechrabbit اجزای برتری را ارائه می دهد که سنتز cDNA رشته اول کارآمد را از قالب های mRNA یا RNA کل تضمین می کند. Biotechrabbit RevertUP™ II Reverse Transcriptase رونویسی معکوس بسیار کارآمد را با افزایش پایداری حرارتی امکان پذیر می کند.
Biotechrabbit RNase Inhibitor یک مهارکننده غیررقابتی قوی RNaseها است. ترکیبی از سنتز cDNA بسیار کارآمد، مهار موثر RNase و برای انعطاف‌پذیری بیشتر، پرایمرهای هگزامر، که به همه RNAهای موجود در واکنش اجازه می‌دهد به عنوان الگو استفاده شوند، و یک آغازگر اولیگو (dT) برای سنتز cDNA از mRNA دم پلی (A) گنجانده شده‌اند. dNTP های خالص، امکان بازده بالای cDNAهای بیش از 19 کیلوبایت را فراهم می کند.
دمای نگه داری : 20-
| کامپوننت | ترکیبات |
|---|---|
| آنزیم رورست‌آپ II (RevertUP II Reverse Transcriptase) | آنزیم رورست‌آپ II، ۲۰۰ واحد/میکرولیتر در بافر ذخیره‌سازی حاوی ۵۰٪ گلیسرول |
| بافر سنتز cDNA (5×) | بافر بهینه‌شده ۵× برای سنتز cDNA |
| مخلوط dNTP (10 mM هر کدام) | محلول آبی (pH 7.0) حاوی ۱۰ mM از هر کدام: dATP، dCTP، dGTP، dTTP به صورت نمک سدیم |
| مهارکننده RNase | مهارکننده RNase، ۴۰ واحد/میکرولیتر در بافر ذخیره‌سازی حاوی ۵۰٪ گلیسرول |
| پرایمر هگزامر | پرایمر تصادفی هگزامر، ۲۵ µM |
| پرایمر Oligo (dT) | پرایمر Oligo (dT)، ۱۰ µM |
| آب درجه PCR | آب فوق خالص، استریل و فیلترشده، عاری از DNase، RNase و پروتئاز |
توضیحات کیت سنتز cDNA:
آنزیم رورست‌آپ II: آنزیم اصلی برای سنتز cDNA با فعالیت ۲۰۰ واحد/میکرولیتر.
بافر سنتز cDNA: بافر بهینه‌شده برای فرآیند سنتز cDNA.
مخلوط dNTP: حاوی چهار نوع dNTP (dATP، dCTP، dGTP، dTTP) برای ساخت cDNA.
مهارکننده RNase: برای جلوگیری از تخریب RNA توسط RNase.
پرایمر هگزامر: پرایمر تصادفی برای شروع سنتز cDNA.
پرایمر Oligo (dT): پرایمر اختصاصی برای اتصال به دم polyA mRNA.
آب درجه PCR: آب خالص و عاری از آلاینده‌های آنزیمی.
دستورالعمل کیت سنتز cDNA:
| عملیات | حجم | غلظت نهایی |
|---|---|---|
| مخلوط dNTP (10 mM هر کدام) | 2 µl | 1 mM (هر dNTP) |
| مهارکننده RNase، 40 U/µl (اختیاری) | 0.5 µl | 1 U/µl |
| اولیگو (dT)12–18 (10 µM) – یا | 0.5 µl | 0.25 µM |
| پرایمر هگزامر (25 µM) – یا | 1 µl | 1.25 µM |
| پرایمر اختصاصی ژن (10 µM) | 0.5 µl | 0.25 µM |
| بافر سنتز cDNA (5×) | 4 µl | 1× |
| الگوی RNA | 0.1–1 µg RNA کل یا 50–500 ng mRNA (polyA) | |
| آنزیم رورست‌آپ II (RevertUP™ II Reverse Transcriptase) | 1 µl | 10 U/µl |
| آب درجه PCR | متغیر | |
| حجم کل | 20 µl |
- مخلوط را ترکیب کرده و با سانتریفیوژ کوتاه، قطرات را جمع‌آوری کنید.
- در صورت استفاده از پرایمر هگزامر، به مدت ۱۰ دقیقه در دمای ۳۰°C و سپس ۲۰ تا ۶۰ دقیقه در دمای ۵۰–۵۵°C انکوبه کنید.
- در صورت استفاده از اولیگو (dT) یا پرایمر اختصاصی ژن، به مدت ۲۰ تا ۶۰ دقیقه در دمای ۵۰–۵۵°C انکوبه کنید.
