آنزیم محدود کننده یا برشی و روش انجام و کاربرد اندونوکلئازها

اندونوکلئازها انزیم‌هایی  دارای عملکرد هیدرولیزکننده پیوند فسفودی‌استری را دارا می‌باشند به همین دلیل آنزیم های محدود کننده نیز نامیده می شوند. اندونوکلئازها  با توجه به فعالیت آنزیمی‌شان در سلول به دنبال توالی ژنی DNAراه میفتند و باتوجه به انواع‌شان ژن را برش میدهند.

اندونوکلئاز ها به دو دسته اختصاصی (آنزیم توالی مشخصی را در DNAسلول یافته و برش میدهد ) و غیر اختصاصی (آنزیم بدون تفاوت بین ژن‌ها DNA را برش میدهد و به صورت تصادفی عمل می‌کند.

آنزیم های برشی و محدود کننده اندونوکلئازها شامل   

DNaseI  /    نوکلئاز S۱  / نیکاز / نوکلئاز P۱ / RNaseH  RNaseONE

آنزیم ها برخی آنزیم‌های غیراختصاصی هستند که در صورت خرید میتوانید با مشاوران ما در شرکت‌یاس‌ژن مشورت کنید.

آنزیم های برشی و محدود کننده اندونوکلئازها در ابتدا در باکتری هاوسیله دفاعی مقابل ویروس‌ها بودند به طوری که باکتری قبل از همانند سازی و تکثیر به منظور محدود کردن و حذف DNAناخوانده بوده اند.حتما از خود میپرسید چگونه با رها کردن این آنزیم  DNA اصلی از بین نمیرود، جوابش متیله سازی خود DNA اصلی توسط سلول قبل از آزاد کردن آنزیم های برش دهنده  است.

آنزیم های برشی و محدود کننده اندونوکلئازها با توجه به شیوه عملکردشان از به چند روش بدست می‌آیند و آنزیم های برشی در اصل چی هستند:

اندونوکلئاز نوع 1(آنزیم های برشی ) :برش دو طرف DNAبه صورت صاف(انتهای چسبنده ایجاد نمی‌کند) مثل ALU 1

اندونوکلئاز نوع 2:یا آنزیم‌های برش‌دهنده و بخش مهم و تجارتی‌تر اندونوکئاز ها، برای کلودینگ ژن و ایجاد انتهای چسبنده است مثل ECR1

آنزیم های برشی یا محدود کننده  دو پروتئین جداگانه به دو طرف دور DNAمیپیچند و هر دو رشته را به صورت جداگانه برش میدهند به صورتی که توالی خاص ژنی را که به نام جایگاه شناسایی هستند شناسایی و دو دو طرف برشی معکوس ولی با توالی یکسان ایجاد می‌کنند. برای مثال در ECR14 نوکلئوتید خاص شناسایی و برش داده می‌شوند.

باتوجه به شکل انتهای چسبنده ایجاد شده توانایی وصل شدن DNAمکمل را به DNAدیگر میدهد تا DNA نوترکیب ایجاد شود. این روش‌ها برای وصل کردن قطعه‌ای از DNAیا ژن برای کلودینگ ژن و تولید محصول مورد نظرمان در سلول هدف ایجاد می‌شود. البته برای وصل کردن DNAبه هم آنزیم لیگاز برای پیوند فیفودی استری بین نوکلئوتیدها لازم است. مثل وصل کردن ژن انسولین از سلول های پانکراس به باکتری برای تولید انسولین در باکتری.

این فرایندها برای فرایند بیوتکنولوژی و کلون سازی ژن و ایجاد DNAنوترکیب و توالی ژنی و برای نقشه برداری ژنی و درمان ژنی استفاده می‌شود .

شما میتوانید برای خرید آنزیم های محدود کننده و برشی اندونوکلئاز ها مورد نیاز  از شرکت های TERMOFISHERو BIOLAB  و…. از طریق شرکت یاس ژن اقدام کنید.